科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的抗体液相芯片检测方法。首先构建pET-28a-p30表达载体，利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白，然后将重组P30蛋白与羧基化的荧光微球偶联，建立ASFV P30抗体液相芯片检测方法。经鉴定，重组质粒成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞，并以包涵体形式表达，Western blot结果显示重组P30蛋白可以与ASFV阳性血清产生特异性反应，证明其具有良好的反应原性。建立的ASFV抗体液相芯片检测方法检测中值荧光强度(median fluorescent intensity, MFI)阈值为1 575.7,最佳结合蛋白浓度为每1.25×106个微球6μg,最佳血清稀释度为1∶600,最佳二抗浓度为1μg·mL-1,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。用建立的方法和商品化ELISA试剂盒同时对92份临床采集的猪血清样本进行检测，结果显示二者符合率为92.39%。本研究成功表达重组P30蛋白，并建立了ASFV P30抗体液相芯片检测方法，为ASFV感染早期的血清学检测提供了新的方法，也为多种病原体的抗体检测奠定了基础。
- 单位
