山羊痘疫苗荧光定量效检方法的建立及应用

作者：张倩; 唐娜; 王金良; 苗立中; 胡琳琳; 孙翠萍; 沈志强

来源：山东农业大学学报(自然科学版), 2015, 46(06): 865-869.

• 山羊痘
• 疫苗
• 荧光定量
• 效力检验

为建立灵敏度高,特异性强的山羊痘(GPV)荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并以稳定的标准品替代定量测定山羊痘疫苗半成品中的核酸。针对山羊痘病毒基因组P32基因设计一对特异性引物,构建稳定的标准品,进行敏感性、特异性和稳定性试验,并对本单位的部分批次山羊痘疫苗半成品进行定量检验,与TCID50效检结果相比较寻求相关性。结果表明建立的标准曲线相关系数为0.9995,扩增效率为98%,该方法只扩增山羊痘病毒,不扩增其他病原,能检测到每微升体积中100个DNA模板拷贝数,比山羊痘普通PCR(GPV-n PCR)高一个数量级。制备三批标准品进行重复性试验,结果变异系数在0.431.9%之间,稳定性良好。对4批的山羊痘疫苗半成品进行效力检验,TCID50≥104.5/m L时Ct值为14.51。建立的GPV-FQ-PCR方法能特异性的检测GPV核酸含量,与TCID50测定的结果具有良好的相关性,可用于山羊痘半成品中核酸的定量测定。