肾复康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞HK-2纤维化模型的影响及其机制研究

作者：黄上; 周琳; 刘劲松^*; 李仲普; 郭玉星; 张晓白; 林哲

来源：中药药理与临床, 2020, 36(04): 154-158.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.2020.04.018

• 肾复康
• 肾纤维化
• 上皮间质转化
• 转化生长因子β1(TGF-β1)
• Smad蛋白2/3
• 整联蛋白连接激酶

目的:探讨肾复康含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞株HK-2间质转化的影响及其分子机制。方法:以HK-2细胞作为研究对象,常规培养后将细胞进行如下分组及刺激处理:空白对照组、模型对照组(10 ng/ml TGF-β1刺激)、32 g/kg尿毒清30%含药血清组(30%尿毒清含药血清+TGF-β1刺激)、18.32 g/kg肾复康10%、30%含药血清组(10%或30%肾复康含药血清+TGF-β1刺激)。MTT法检测肾复康含药血清对HK-2细胞活力的影响;显微镜下观察各组细胞间形态学的差异;ELISA法检测各组细胞上清液中I型胶原(collagen I)和纤维连接蛋白(fibronectin)的水平;q-PCR法检测各组细胞内E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和整联蛋白连接激酶(ILK)基因的表达水平;蛋白免疫印迹法检测Smad2/3总蛋白、核蛋白表达及其磷酸化水平;蛋白免疫印迹法检测下游的ILK蛋白表达水平。结果:肾复康含药血清对HK-2细胞的存活率无抑制作用;与空白对照组比较,模型对照组细胞形态由上皮样的铺路石状变成间质样的长梭形,E-cadherin的mRNA水平显著下调(P<0.01),Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平显著上调(P<0.01),Smad2/3的蛋白磷酸化及核内水平显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,肾复康各含药血清组E-cadherin的mRNA水平显著上调(P<0.01),Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平显著下调(P<0.05或P<0.01),Smad2/3的蛋白磷酸化及核内水平明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:肾复康能逆转TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞HK-2纤维化模型的上皮间质转化,其作用机制可能与其抑制胞内Smad2/3-ILK信号通路的活化有关。

• 单位
  湖南中医药大学; 中南大学