摘要
目的探讨长链非编码RNA uc. 412(Lnc RNA uc. 412)在肾脏纤维化中的作用及可能的作用机制。方法将12只雄性C57B/6小鼠随机分为对照组和单侧输尿管结扎(UUO)组,各6只。UUO组小鼠行左侧单侧输尿管结扎手术使其梗阻,构建肾脏纤维化模型;对照组小鼠行输尿管钝性分离但未进行结扎。于术后14 d处死小鼠,分别收集两组小鼠的血液及肾脏组织标本,检测血肌酐、血尿素氮; Masson染色检测肾脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法检测肾组织内Lnc RNA uc. 412、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、胶原蛋白1(COL1)基因表达水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肾组织中COL1蛋白的表达。体外培养大鼠系膜细胞,以TGF-β1和si RNA处理细胞,应用q PCR法检测Lnc RNA uc. 412表达,Western blot法检测细胞内α-SMA蛋白的表达。体外培养大鼠系膜细胞,以TGF-β1、Smad3磷酸化特异性抑制剂SIS3处理细胞,q PCR法检测Lnc RNA uc. 412表达水平。结果动物实验中,UUO组小鼠血肌酐和血尿素氮水平显著高于对照组[(135.6±4.1)μmol/L比(14.4±0.9)μmol/L,(23.4±2.2) mmol/L比(8.3±1.3) mmol/L](P <0.01),Masson染色显示UUO组纤维化改变明显。UUO组小鼠组织内LncRNA uc. 412、α-SMA、TGF-β1、COL1的mRNA高于对照组[(13.07±3.78)比(1.05±0.30),(13.03±2.20)比(1.16±0.54),(14.87±5.18)比(1.20±0.77),(188.61±34.79)比(1.03±0.25)](P <0.05),且UUO组COL1蛋白表达量明显高于对照组[(2.629±0.045)比(0.969±0.003)](P <0.01)。siRNA对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞中,TGF-β1组Lnc RNA uc. 412的表达高于对照组,TGF-β1+25 nmol/L siRNA组、TGF-β1+50 nmol/L siRNA组、TGF-β1+75 nmol/L siRNA组低于TGF-β1组(P <0.05); TGF-β1组α-SMA蛋白表达高于对照组,TGF-β1+si RNA组低于TGF-β1组(P <0.05)。SIS3干预大鼠系膜细胞中,TGF-β1组LncRNA uc. 412表达高于对照组,TGF-β1+SIS3组低于TGF-β1组P <0.05)。结论Lnc RNA uc. 412表达水平升高参与UUO模型肾脏纤维化的发生。TGF-β1可能通过TGF-β1/Smad3信号通路诱导系膜细胞Lnc RNA uc. 412的表达增加,进而引起肾脏纤维化的改变。
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单位南京医科大学第二附属医院