食品中单核细胞增生李斯特氏菌ddPCR定量检测方法的建立及应用

作者：魏茂琳; 姜彦芬; 韩钦; 孙晓霞; 王金凤; 刘立兵; 王建昌^*

来源：中国口岸科学技术, 2023, 5(11): 81-89.

• 单核细胞增生李斯特氏菌
• 微滴式数字PCR
• 平板计数
• 定量检测

本研究针对食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)建立一种快速定量的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法。通过优化反应条件和反应体系，建立食品中LM的ddPCR快速定量检测方法，并对该方法进行特异性、灵敏性以及重复性考察，以即食食品香肠和乳制品奶酪棒为样品进行人工污染，验证该方法的可行性。结果显示：经优化后，确定ddPCR方法的最佳上、下游引物浓度均为900 nmol/L，最佳探针浓度为250 nmol/L，最佳退火温度为58.3℃，延伸时间为60 s，循环数为45个循环。建立的ddPCR方法特异性良好，定量限(LOQ)为294 CFU/mL，重复检测的变异系数均小于12%;ddPCR定值结果与平板计数结果间存在良好的线性相关性(R2=0.998)。在人工添加试验中同时进行ddPCR与平板计数检测，LOQ可达102 CFU/g，呈现出良好的重复性、准确性。本研究建立的食品中LM的ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏性高、准确性好，能够为LM的快速定量检测提供技术支持。

• 单位
  河北医科大学; 公共卫生学院