应用酵母双杂交技术筛选肝细胞cDNA文库中乙型肝炎病毒前-X蛋白结合蛋白基因

作者：刘敏王琳成军张树林邵清**杨倩董菁

来源：世界华人消化杂志, 2004, (04): 40-43.

• cDNA文库
• 乙型肝炎病毒
• X蛋白
• 肝细胞癌
• 结合蛋白
• 酵母双杂交技术
• 玻连蛋白
• 酵母表达载体
• 人肝细胞
• 酵母细胞

目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白结合蛋白的编码基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV基因组中的前-X 基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5 α),提出质粒并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出HBV的前-X基因,构建表达载体并在酵母细胞中表达,配合后选出在四重缺陷(SD/-Trp-Leu- Ade-His)培养基及铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的...

• 单位
  西安交通大学; 解放军第302医院