精子相关抗原6基因以非P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征细胞凋亡

作者：朱春霞; 王利; 罗小华; 刘林

来源：第三军医大学学报, 2018, 40(03): 198-204.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201709167

• 精子相关抗原6基因
• P53基因
• TRAIL
• RNA干扰
• 骨髓增殖异常综合征

目的研究精子相关抗原6(sperm-associated antigen 6,SPAG6)基因是否以P53依赖方式促进TRAIL诱导的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞凋亡。方法通过P53kd RNA慢病毒转染人结肠癌细胞株HCT116筛选P53基因沉默的最佳靶点,利用筛选出来的最佳靶点序列转染SKM-1细胞;加入嘌呤霉素提高转染效率,RT-PCR及Western blot检验P53基因的干扰效果,构建SKM-1 P53kd细胞模型。用SPAG6kdRNA慢病毒载体转染SKM-1和SKM-1 P53kd细胞,RT-PCR及Western blot验证。用CCK-8法检测重组人可溶性TRAIL蛋白(r TRAIL)对SKM-1细胞的适宜作用浓度。Western blot检测r TRAIL处理后SKM-1和SKM-1 P53kd细胞株中Caspase-8、cleaved-PARP、PARP的表达水平。结果构建了SKM-1 P53kd细胞模型,转染率在90%以上,P53基因在mRNA和蛋白表达水平较对照组均显著降低(P<0.01)。SPAG6kdRNA慢病毒载体成功感染SKM-1细胞和SKM-1 P53kd细胞,转染率均在80%以上,SPAG6基因表达较对照组明显降低(P<0.01)。随着r TRAIL浓度的增加,细胞生长逐渐被抑制,30 ng/m L TRAIL诱导的细胞凋亡与对照组差异没有统计学意义,100 ng/m L和300 ng/m L TRAIL显著诱导SPAG6kd细胞凋亡(P<0.05),而P53基因沉默与否并没有影响该结果,r TRAIL处理后细胞凋亡标志分子明显激活或水平升高,细胞中Caspase-8、cleaved-PARP、PARP的表达水平在SKM-1和SKM-1 P53kd细胞中差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SPAG6基因以非P53依赖方式促进TRAIL诱导的MDS细胞凋亡。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院