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摘要
背景:软骨细胞受损后再生能力较差,以干细胞为基础的治疗方案已成为关节软骨修复的新型治疗方法。目的:观察补骨脂素联合转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。方法:全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,CCK-8实验筛选出补骨脂素促进骨髓间充质干细胞增殖的有效浓度;将第3代骨髓间充质干细胞分为正常对照组(含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL双抗的低糖DMEM培养液)、补骨脂素组(在正常对照组基础上添加10-7 mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10μmol/L补骨脂素)、补骨脂素联合转化生长因子β1组(在正常对照组基础上添加10μg/L转化生长因子β1、10-7 mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10μmol/L补骨脂素)、阳性对照组(在正常对照组基础上添加10μg/L转化生长因子β1、10-7 mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C)。诱导21 d后,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色鉴定Ⅱ型胶原表达;RT-PCR和Western blot分别检测软骨分化标记基因Ⅱ型胶原、SOX-9的mRNA和蛋白表达。结果与结论:(1)免疫细胞化学染色显示,正常对照组未见阳性细胞,其余3组均可见Ⅱ型胶原阳性细胞;(2)与正常对照组比较,补骨脂素组、联合组及阳性对照组SOX-9、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达明显增加(P <0.05),其中联合组效果最佳(P <0.01),且明显优于阳性对照组及补骨脂素组(P <0.05);(3)结果表明,在一定的浓度范围内,补骨脂素可以促进骨髓间充质干细胞增殖;补骨脂素可以诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,其与转化生长因子β1联合使用具有协同促进作用。
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