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摘要
枣疯病(jujube witches’-broom, JWB)俗称枣树的“癌症”,是由枣疯病植原体导致的侵染性病害，给我国的枣栽培与生产造成了严重危害，对枣疯病植原体增殖基因的研究有助于枣疯病的有效防治。为获得枣疯病植原体胸苷激酶基因(tdk),利用PCR方法扩增该基因并测序，结果表明，该基因的开放阅读框长度为576 bp,编码191个氨基酸，其蛋白质分子量为21.76 ku。序列分析和预测表明，该蛋白质为植原体细胞质中性质相对稳定的亲水蛋白质。遗传距离和进化树分析显示，植原体tdk基因比其16S rDNA基因的保守程度低，tdk基因和16S rDNA基因序列的进化树高度相似，表明tdk基因适于植原体分子分类。为获得枣疯病植原体TDK蛋白，成功构建了原核表达载体pET-28a-JWB-Heze-tdk;在诱导条件为0.1 mmol·L-1 IPTG、20℃、140 r·min-1时，该原核表达载体在Escherichia coli BL21(DE3)菌株中可表达出大量可溶性的N端融合了6×His标签的JWB-Heze TDK蛋白；利用Ni-IDA琼脂糖树脂纯化出了可溶性的JWB-Heze TDK融合蛋白。研究结果为JWB-Heze TDK体外酶活性测定和抗体制备奠定了基础。
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单位菏泽学院; 生物工程学院
