RNAi沉默HIF-1α基因调控乏氧肺腺癌A549细胞放射敏感性和自噬能力

作者：邹燕梅; 熊华; 肖志平; 于世英; 袁响林

来源：中国癌症杂志, 2013, 23(06): 413-419.

DOI：10.3969/j.issn.1007-3969.2013.06.003

• 乏氧
• 自噬
• 放射敏感性
• HIF-1α
• RNAi

背景与目的:乏氧导致肿瘤细胞放射敏感性下降是引起肿瘤放疗抵抗、复发转移的根源。HIF-1α基因在乏氧调控中起关键作用,但HIF-1α基因在乏氧肺腺癌放射敏感性中的作用及其与自噬的关系尚未阐明。本研究建立利用RNAi沉默HIF-1α基因的乏氧肺腺癌A549细胞模型,以此探讨HIF-1α对乏氧细胞放射敏感性和自噬的影响。方法:构建靶向抑制HIF-1α的shRNA表达质粒,转染乏氧A549细胞,筛选稳定表达的克隆细胞,将其命名为A549/HIF-1α-shRNA,同时设阴性对照A549/Neg-shRNA。克隆形成实验检测细胞D0、SF2、SER等值。Western-blot检测细胞照射前后HIF-1α、LC3、c-parp蛋白的表达。结果:乏氧A549细胞的SF2为0.62,高于常氧A549细胞,SER为1.45;乏氧A549细胞照射后LC3Ⅱ增加,c-parp下调。乏氧A549细胞HIF-1α表达增加;A549/HIF-1α-shRNA细胞HIF-1α表达降低;A549/HIF-1α-shRNA细胞的SF2为0.45,SER为0.72,低于A549/Neg-shRNA细胞;A549/HIF-1α-shRNA细胞照射后LC3Ⅱ降低,c-parp上调。结论:稳定转染及RNAi技术建立的HIF-1α表达抑制克隆可以成为简单实用的细胞模型;shRNA抑制HIF-1α的表达可提高乏氧A549细胞的放射敏感性,降低自噬活性。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院