绵羊肺炎支原体Hsp70蛋白C末端基因真核表达载体的构建

作者：杨源; 王慧; 王军; 张云丹; 文明; 周碧君; 程振涛^*; 岳筠; 张双翔

来源：畜牧与兽医, 2018, 50(12): 59-63.

• 绵羊肺炎支原体
• Hsp70蛋白
• 核酸疫苗
• 真核表达

为探讨绵羊肺炎支原体(Mo) Hsp70蛋白作为核酸疫苗的可能性,在对Mo贵州分离株Hsp70蛋白基因进行生物信息学分析的基础上,选择Mo Hsp70蛋白C末端基因,将其与载体pcDNA 3.1 (+)进行连接构建重组质粒,通过脂质体转染至CHO细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光方法评价转染效果和真核细胞表达效果。结果显示:Mo贵州分离株Hsp70蛋白的C末端是具有优势抗原表位的区域,通过PCR方法成功扩增出567 bpHsp70蛋白的C末端基因,并成功构建pc DNA 3.1-Hsp70重组质粒,在转染细胞中PCR扩增出预期大小的目的基因,可以观察到特异性的绿色荧光,提示本研究成功构建的重组质粒能在真核细胞中良好表达,为后续Mo Hsp70蛋白抗原性和免疫佐剂特性的研究奠定基础。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学