吴茱萸碱通过MAPK信号通路抑制人胃癌细胞的体外实验研究

作者:千维娜; 李治; 方瑜; 姜伊娜; 肖海娟*
来源:第三军医大学学报, 2021, 43(16): 1535-1542.
DOI:10.16016/j.1000-5404.202103002

摘要

目的探讨吴茱萸碱通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路对人胃癌细胞的抑制作用。方法应用MTT法对SGC-7901细胞活性进行评定。以8、16、32μmol/L吴茱萸碱作用胃癌SGC-7901细胞(记为A1组,A2组,A3组),另设置相同浓度吴茱萸碱处理后的细胞,加入p38抑制剂(记为B1组,B2组,B3组),对照组用细胞培养液处理作为空白对照。Annexin V-FITC/PI法观察细胞凋亡,PI染色法观察细胞周期,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved-caspase-3,划痕愈合实验评价细胞迁移抑制情况,蛋白质印迹法检测c-dc2、cdc25C、cyclin B1及p-ERK、p-p38蛋白水平表达。结果吴茱萸碱能够阻碍SGC-7901细胞增殖,细胞活性随着浓度和时间的增加而降低,24、48 h的IC50分别是16.78、7.28μmol/L。与对照组(0.06%)比较,A组SGC-7901细胞凋亡比例(18.72%、31.08%、52.17%)增加,G2/M细胞周期阻滞,与A组比较,B组SGC-7901细胞凋亡比例减少,G2/M细胞周期阻滞减弱,G2/M期调控蛋白cdc2、cdc25C、cyclin B1水平下调(P均<0.05)。划痕愈合实验表明SGC-7901细胞的细胞划痕愈合率伴随吴茱萸碱浓度升高而降低;与A组(59.13%、23.15%、18.31%)比较,B组细胞划痕愈合率(63.17%、55.27%、34.08%)升高(P<0.05)。Western blot结果表明吴茱萸碱处理Bcl-2、cleaved-caspase-3水平上调,SGC-7901细胞MAPK通路蛋白p-ERK水平下调,p-p38表达水平上调(P<0.05)。与A组比较,B组cdc2、cdc25C、cyclin B1表达上调,Bcl-2、cleaved-caspase-3水平显著下降,MAPK通路蛋白p-ERK水平上调,p-p38水平下调(P<0.05)。结论吴茱萸碱对胃癌细胞有抑制作用,其机制是通过MAPK信号通路下调p-p38蛋白、上调凋亡蛋白实现。

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