Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达

作者：李红雨; 朱涛; 周金华; 徐茜; 胡春霞; 邓东锐; 王世宣; 卢运萍; 马丁

来源：华中科技大学学报(医学版), 2007, (05): 633-636.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2007.05.020

• 肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1
• 质粒构建
• 基因转染

目的构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达。结果RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆。结论重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 郑州大学第三附属医院