pcDNA3．1(+)／GDF-5真核表达质粒的构建及其在小鼠骨髓基质干细胞的表达

作者：张宇坤; 杨述华; 杨操; 吴星火; 孙立

来源：中国药师, 2006, 9(09): 786-789.

DOI：10.3969/j.issn.1008-049X.2006.09.002

• GDF-5
• 基因转染
• 骨髓基质干细胞

目的:通过基因重组技术体外构建真核表达质粒pcDNA3．1(+)／GDF-5,并检测其在小鼠骨髓基质干细胞中的表达。方法:提取孕14 d小鼠胚胎肢芽组织总RNA,RT-PCR扩增,将扩增产物GDF-5基因片断插入至pcDNA 3．1(+)载体,并进行酶切鉴定及测序;脂质体介导pcDNA 3．1(+)／GDF-5重组质粒瞬时转染小鼠MSC,RT-PCR和免疫细胞化学检测GDF-5的表达。结果:重组质粒双酶切图谱显示有5．4 kbp和1．6 kbp两条带;测序结果与Genbank中的序列完全相同;转染后RT- PCR显示实验组有一219bp特异性条带,免疫细胞化学检测发现实验组细胞胞浆内有棕色阳性染色,实验对照组和空白组均为阴性。结论:本实验成功构建pcDNA3．1(+)／GDF-5真核表达质粒,转染小鼠MSC中有GDF-5表达,为进一步研究其在软骨发育机制和软骨骨组织工程领域提供了实验基础。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院