基于可视化环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

作者：郭建平; 万佳佳; 陆兆新; 吕凤霞; 张充; 赵海珍; 别小妹^*

来源：食品科学, 2019, 40(20): 325-331.

• 可视化
• 环介导等温扩增技术
• 检测
• 金黄色葡萄球菌
• 羟基萘酚蓝

应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法。优化的反应体系为:1.6μmol/L内引物(FIP和BIP),0.2μmol/L外引物(F3和B3),4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/μL Bst 2.0 WarmStart?DNA聚合酶,120μmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60℃,扩增时间60 min。在可视化LAMP体系中添加两条环引物(LF和LB)反应时间可缩短至20 min。该可视化LAMP反应60 min,其基因组灵敏度可以达到0.010 3 fg/μL,菌落灵敏度可以达到1.9 CFU/mL;利用46株金黄色葡萄球菌和24株非金黄色葡萄球菌证实该可视化LAMP具有良好的特异性和可靠性。本研究中建立的可视化LAMP可为金黄色葡萄球菌的快速检测提供一种新的技术。

• 单位
  南京农业大学