鳗鲡疱疹病毒免疫原性蛋白ORF36的鉴定、表达及特征分析

作者：陈曦; 杨金先; 陈华; 葛均青^*

来源：农业生物技术学报, 2023, 31(08): 1710-1718.

• 鳗鲡疱疹病毒(AngHV)
• ORF36
• 原核表达
• 多克隆抗体
• 中和作用
• 定位

鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AngHV)是鳗鲡(Anguilla)的一种重要病毒性病原，可引起养殖鳗鲡暴发“脱黏败血综合征”，给养殖者造成巨大的经济损失。开展AngHV的免疫原性蛋白研究对于开发AngHV的免疫学诊断技术及亚单位疫苗具有重要意义。为了获得鳗鲡疱疹病毒的免疫原性蛋白，本研究通过质谱分析AngHV病毒粒子结构蛋白，筛选到ORF36，对其氨基酸序列进行生物信息学分析，克隆至原核表达载体进行诱导表达；用纯化的重组表达蛋白制备兔抗多克隆抗体，评价该抗体检测AngHV的特异性、灵敏性以及病毒中和效果，并对ORF36进行病毒粒子结构定位。结果显示，通过质谱鉴定出病毒的主要免疫原性蛋白ORF36；序列分析显示，ORF36无跨膜结构域，不含有信号肽，具有13个B细胞抗原表位，免疫原性良好；克隆ORF36至原核表达载体pET-30a，实现了其在大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的高效表达，重组表达蛋白大小约为40 kD;ELISA检测显示，制备的兔抗ORF36多克隆抗体效价为1∶8 000;Western blot结果显示，该抗体能特异性识别感染AngHV的鳗鲡卵巢细胞系(eel ovary cell line, EO)及鳗鲡组织，最低可检测的内脏组织的病毒量为1 000 PFU；抗体中和试验表明，制备的兔抗ORF36多克隆抗体具有中和作用，能显著降低AngHV的病毒滴度；ORF36的病毒粒子定位分析表明，ORF36是病毒粒子的结构蛋白且定位于核衣壳上。本研究鉴定出病毒的主要免疫原性蛋白ORF36，制备了具有病毒中和作用的ORF36多克隆抗体，明确了ORF36为AngHV核衣壳结构蛋白，为阐明ORF36在AngHV侵染过程中的作用及开发病毒亚单位疫苗提供了参考。

• 单位
  福建省农业科学院