人分化抑制因子Id-2基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

作者：童铁钢; 林燕; 穆丹梅; 白宇; 杨木蕾; 郑敏; 吴东来

来源：南方医科大学学报, 2009, (06): 1094-1097+1110.

• 人Id-2基因
• 基因表达
• 多克隆抗体 inhibitor of DNA binding and differentiation
• human
• gene expression
• polyclonal antibodies

目的在大肠杆菌中表达人Id-2与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-2的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-2基因的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-2融合蛋白,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性,并以此为抗原制备多克隆抗体。结果经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-2基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量40000的GST-...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 大庆油田总医院; 黑龙江大学; 哈尔滨医科大学附属第一医院; 兽医生物技术国家重点实验室; 农业部