摘要
目的研究中介素(IMD)对大鼠肾小球内皮细胞(r RGEC)缺氧损伤的作用。方法 r RGEC传代培养后,随机分为正常组(N组),缺氧组(H组)及IMD组,根据培养液中IMD的终浓度将缺氧处理组分为10-8mol/L(IMD1)、10-7 mol/L(IMD2)、10-6 mol/L(IMD3)组。流式细胞仪分析细胞凋亡;检测内皮单层底顶室异硫氰酸荧光素(FITC)-BSA荧光强度,以底顶室荧光强度比值的变化来表示细胞通透性的变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中4-羟壬烯醛(4-HNE)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)变化;实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)m RNA的表达;免疫细胞化学法检测HIF-1α及VEGF蛋白表达并进行半定量分析。结果与N组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率均降低(P<0.05);H、IMD1、IMD2、IMD3组细胞通透性均增加(P<0.05),H组上清中4-HNE、ROS升高,SOD降低(P<0.05);IMD2组HIF-1αm RNA相对表达量及蛋白含量增高(P<0.05),VEGFm RNA相对表达量及蛋白含量增高(P<0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率均降低(P<0.05),细胞通透性降低(P<0.05),4-HNE、ROS降低,SOD升高(P<0.05),IMD2组HIF-1αm RNA相对表达量及蛋白含量增高(P<0.05),VEGF m RNA相对表达量及蛋白含量增高(P<0.05)。相关分析发现HIF-1αm RNA、VEGF m RNA相对表达量与细胞凋亡率呈较强负相关(r=-0.919、-0.911,P<0.05)。结论 IMD可减轻肾小球内皮细胞缺氧损伤,保护肾小球内皮细胞,与其上调VEGF与HIF-1α生成有关。
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单位山西医科大学第二医院; 山西医科大学