细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-InTMCHO细胞系的建立

作者：何俊奇; 陆定艳; 陈帅帅; 李勇军; 王永林; 郑江; 刘亭^*

来源：贵州医科大学学报, 2023, 48(12): 1454-1458.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2023.12.004

• 细胞色素P450 3A4
• 黄曲霉毒素B1
• 突变体
• 稳定表达
• TM CHO细胞" name="keyword">Flp-InTM CHO细胞

目的 构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的Flp-InTM CHO细胞系。方法 使用Lipofectamine2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-InTM CHO细胞，潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达，采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性。结果 与Flp-InTM CHO-空质粒组相比，Flp-InTM CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.001),AFB1细胞毒性实验显示，CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论 成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-InTM CHO细胞系，且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础。

• 单位
  贵州医科大学