PD-L1过表达在DENV-2诱导血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用机制

作者：姚峰; 朱磊; 程波; 杨明; 刘敏^*

来源：天津医药, 2021, 49(03): 231-236.

• 登革热病毒
• 内皮细胞
• 自噬
• 细胞凋亡
• 程序性细胞死亡受体-1配体

目的探讨PD-L1过表达在Ⅱ型登革病毒(DENV-2)影响血管内皮细胞自噬和凋亡中的作用及机制。方法以血管内皮细胞EAhy926为研究对象,以含梯度DENV-2(1×108～2×109pfu/L)的无血清培养基处理细胞24 h和48 h,同时以无血清培养基处理细胞作为对照组,无血清培养基加入空白孔作为调零孔,MTT法检测细胞增殖活力。以PD-L1过表达慢病毒液和空载慢病毒液处理细胞,分别设空载对照组和转染组。DENV-2(1.2×109pfu/L)处理细胞12、24、48 h作为DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组,同时设置对照组(无血清培养基处理);另以DENV-2处理空载对照组和转染组48 h,以蛋白印迹法检测LC3B、Beclin-1及Bcl-2蛋白表达变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 1×108～2×109pfu/LDENV-2可剂量依赖性抑制EAhy926细胞增殖,DENV-2 24 h和48 h的半数抑制浓度(IC50)分别是1.8×109pfu/L和1.2×109pfu/L。与对照组比较,DENV-2 12 h组、DENV-2 24 h组及DENV-2 48 h组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,细胞总凋亡率增加(均P<0.05)。与空载对照组比较,转染组PD-L1蛋白表达上调(P<0.01)。DENV-2处理48 h,与空载对照组相比,转染组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,细胞总凋亡率降低(均P<0.01)。结论 DENV-2通过上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达及下调Bcl-2蛋白表达,从而诱导EAhy926细胞自噬和凋亡,而过表达PD-L1可抵抗DENV-2的诱导效应。

• 单位
  武汉市第六医院