人源m6A甲基转移酶复合物METTL3-METTL14的表达、纯化和透射电镜观察

作者：韩妍妍; 闫慧芳; 王清华; 马剑鹏^*

来源：复旦学报(自然科学版), 2023, 62(03): 400-408.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.20220808.001

• 6A修饰" name="keyword">m6A修饰
• METTL3
• METTL14
• 120 kV透射电子显微镜

N6-腺苷酸甲基化(m6A)是一种重要的mRNA和长链非编码RNA的内部修饰方式，通过影响RNA代谢的各个方面，参与调控人体一系列生理过程。METTL3和METTL14组成的甲基转移酶复合物可以有效地催化甲基基团的转移，但其具体的催化机制尚不完全清楚。本研究通过进行蛋白质结构无序度分析及三维模型预测发现，二者除MTD结构域外其他区域基本处于无序或低复杂度状态。为了进一步探索METTL3-METTL14复合物实现甲基基团转移的结构基础，本研究在哺乳动物细胞HEK293S GnTI-中成功表达了全长序列的人源METTL3-METTL14蛋白复合物，并通过镍柱亲和层析、离子交换及凝胶过滤层析获得了高纯度的METTL3-METTL14蛋白复合物，并推测全长METTL3和METTL14以1∶1的比例组成复合物。通过120 kV透射电子显微镜观察发现，蛋白颗粒大小均一，颗粒直径在10～12 nm。

• 单位
  生命科学学院; 复旦大学