SikCDPK1基因EF-hand的定点突变、原核表达及蛋白纯化

作者：郭家秀; 朱新霞^*

来源：分子植物育种, 2023, 21(02): 503-509.

DOI：10.13271/j.mpb.021.000503

• SikCDPK1
• EF-hand
• 定点突变
• 原核表达
• 蛋白纯化

钙依赖性蛋白激酶(calcium dependent protein kinase, CDPK)通过与Ca2+相互作用，在植物响应各种逆境胁迫的过程中发挥重要作用，其C端调控区的EF-hand基序是使CDPK的激活依赖于Ca2+的关键结构。为进一步研究具有极强耐寒性的天山雪莲对逆境的响应机制，本研究采用PCR定点突变技术，将SikCDPK1基因EF-hand基序的第435、第471、第507和第540位氨基酸分别由E(谷氨酸)突变为Q(谷氨酰胺)，构建定点突变原核表达载体，转化表达菌株E. coli BL21 (DE3)，使用IPTG诱导蛋白表达，利用亲和层析系统对重组蛋白进行纯化。结果显示，重组菌株能够成功表达出目的重组蛋白，重组蛋白可溶性表达量较高的诱导培养条件是18℃1 mmol/L IPTG诱导16 h，最后成功纯化出符合预期大小的可溶性蛋白，为进一步探究SikCDPK1中不同EF-hand基序的生物学功能提供了实验依据。

• 单位
  石河子大学; 生命科学学院