神经束蛋白155高表达少突胶质细胞模型的构建

作者：胡斌; 王成举; 陈鹏慧; 张雨平^*

来源：山东医药, 2019, 59(18): 28-31.

• 神经束蛋白155
• 慢病毒载体质粒
• 神经束蛋白155慢病毒载体质粒
• 少突胶质细胞
• 脑白质损伤

目的构建神经束蛋白155(neurofascin155,NF155)高表达的少突胶质细胞模型。方法 RT-PCR法提取NF155 c DNA,经T-A克隆及双酶切将其与p UM-T simple重组,构建NF155慢病毒载体质粒,NheⅠ、AgeⅠ双酶切后,片段大小及基因测序均显示NF155慢病毒载体质粒构建成功。取对数生长期少突胶质细胞分为空白对照组、阴性慢病毒感染组、NF155慢病毒感染组,空白对照组不做任何处理,阴性慢病毒感染组予10μL空载体慢病毒+100μL培养基,NF155慢病毒感染组予10μL慢病毒载体质粒+100μL培养基。培养12 h采用荧光定量PCR法检测NF155 mRNA,采用Western blotting法检测NF155蛋白。结果 NF155慢病毒感染组、空白对照组、阴性慢病毒感染组NF155 mRNA相对表达量分别为3. 25±0. 11、1. 00±0. 06、1. 08±0. 01,与空白对照组、阴性慢病毒感染组比较,NF155慢病毒感染组NF155 mRNA相对表达量升高(P均<0. 05)。NF155慢病毒感染组、空白对照组、阴性慢病毒感染组NF155蛋白相对表达量分别为1. 57±0. 08、0. 51±0. 12、0. 50±0. 06,与空白对照组、阴性慢病毒感染组比较,NF155慢病毒感染组NF155蛋白相对表达量升高(P均<0. 05)。结论成功构建NF155高表达的少突胶质细胞瞬转细胞模型。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 基础医学院