基于AKT/mTOR通路探讨齐墩果酸调控自噬对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用

作者：赵欣敏; 卢金莹; 王高; 赵艳; 杨菁^*; 高秀秋^*

来源：中药药理与临床, 2023, 1-11.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.20231117.007

• 齐墩果酸
• 软骨细胞
• 白细胞介素-1β
• 自噬
• AKT/mTOR信号通路

目的：探讨齐墩果酸对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导软骨细胞损伤的保护作用及机制。方法：培养软骨细胞，利用甲苯胺蓝染色法及COL Ⅱ免疫荧光染色对软骨细胞进行纯度鉴定。将合格细胞随机分为空白对照组、模型对照组及齐墩果酸0.125、0.25、0.5 μmol/L组。空白对照组用常规培养液培养；模型对照组用含10 ng/mL IL-1β常规培养液培养24 h建立损伤模型；齐墩果酸各浓度组以常规培养液预处理2 h后，再用10 ng/mL的IL-1β继续培养24 h。采用MTT法检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（ROS）含量；Western Blot检测细胞中MMP-13、COLⅡ、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR和β-actin的蛋白表达；免疫荧光法检测LC3在软骨细胞中的表达；加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine，3-MA）探究自噬在其中作用。结果：与空白对照组相比，模型对照组细胞存活率降低至50.95%，凋亡率、ROS含量、MMP-13、P62的表达及p-AKT/AKT和p-mTOR/ mTOR的比值均显著增加（P＜0.01），COL Ⅱ的表达及LC3 II/I的比值均显著降低（P＜0.01）；与模型对照组相比，齐墩果酸0.125、0.25、0.5 μmol/L组存活率明显升高了26.03%、34.70%、44.37%，凋亡率降低了3.55%、9.94%、10.99%，ROS含量、MMP-13、P62的表达及p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的比值均显著降低，COL Ⅱ表达及LC3 II/I的比值均显著升高（P＜0.01），免疫荧光可见LC3荧光强度随着齐墩果酸浓度增加逐渐增强；与齐墩果酸组相比，3-MA+齐墩果酸组细胞存活率降低至47.03%，COL II表达与LC3 Ⅱ/Ⅰ的比值表达均降低，MMP-13、P62的表达均上调（P＜0.01）。结论：齐墩果酸对IL-1β引起的软骨细胞损伤具有保护作用，其作用机制与抑制AKT/mTOR信号通路及改善自噬有关。

• 单位
  锦州医科大学; 基础医学院