5-Aza-CdR干扰人子宫内膜样癌JEC细胞后ER拮抗剂对细胞增殖、形态及p57kip2蛋白表达的影响

作者：钟栎; 周俊; 张春英; 周正平^*

来源：遵义医科大学学报, 2021, 44(01): 1-8.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2021.0001

• 子宫内膜癌
• 雌激素受体拮抗剂
• 5-氮杂-2′-脱氧胞苷
• kip2" name="keyword">p57kip2

目的探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)预处理人子宫内膜样癌(Endometrioid carcinoma, EC)JEC细胞后,雌激素受体(Estrogen receptor, ER)拮抗剂他莫昔芬(Tamoxifen, TAM)、氟维司群(ICI-182780,ICI)对JEC细胞生长、形态改变及p57kip2蛋白表达的影响。方法将JEC细胞用5-Aza-CdR处理后,用亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)法检测细胞中p57kip2启动子区的甲基化率。将JEC细胞分为6组:对照组、雌二醇(β-estradiol, E2)组、TAM组、ICI组、E2+TAM组、E2+ICI组,待5-Aza-CdR处理后,用甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测各组细胞培养24、48、72 h的增殖活性;用光镜和电镜观察培养72 h时细胞的形态改变,用蛋白印迹(Western blot)法检测培养72 h时细胞中p57kip2蛋白的表达情况。结果用5-Aza-CdR处理后,JEC细胞中p57kip2启动子区甲基化率从81.1%降为76.2%。与对照组比较,细胞增殖活性在E2组均升高,在ICI组、E2+TAM组、E2+ICI组则均降低,且均在24 h改变最明显(P<0.05)。对照组细胞呈圆形或类圆形,细胞游离缘见少量微绒毛;与对照组相比,E2组细胞密度明显升高,E2+TAM组密度明显降低;在TAM组、ICI组、E2+TAM组、E2+ICI组中,可见更多的分泌泡,在TAM组、E2+ICI组则可见明显的凋亡小体。与对照组比较,在E2组中p57kip2蛋白表达减少(P<0.05),在ICI组、E2+TAM组、E2+ICI组中p57kip2蛋白表达均增高(P<0.05),以E2+TAM组增高最明显。结论 5-Aza-CdR可下调JEC细胞中p57kip2基因启动子区的高甲基化水平,从而恢复抑癌因子p57kip2的生物活性,逆转TAM对JEC细胞的弱雌激素样作用,增强ICI对JEC细胞增殖的抑制作用;还可能协同TAM、ICI上调p57kip2蛋白的表达水平,拮抗E2对p57kip2蛋白水平的下调作用,达到削弱CDK的激酶活性,从而发挥负向调控细胞周期、抑制JEC细胞进一步生长的作用。

• 单位
  遵义医科大学