塞内卡病毒A VP1蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备与初步应用

作者：彭宛清; 钱炳旭; 廖凯; 董雨豪; 薛峰^*; 尼博^*; 薛青红; 戴建君

来源：中国兽医科学, 2022, 52(07): 867-874.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0095

• 塞内卡病毒A(SVA)
• VP1蛋白
• 单克隆抗体
• 竞争ELISA

塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)感染猪可引起口鼻、蹄和冠状动脉带等部位出现水疱，严重危害猪的健康。VP1蛋白是SVA重要的结构蛋白，含有病毒主要的抗原表位并可诱导猪产生中和抗体。本研究采用原核表达系统，将VP1基因分别克隆入表达载体pET32a和pGEX6P1中构建重组质粒，通过优化诱导表达条件，利用亲和层析介质纯化，成功制备了重组蛋白VP1-His和VP1-GST。以纯化的VP1-His蛋白免疫BALB/c小鼠，以纯化的VP1-GST蛋白建立间接ELISA，成功筛选获得3株稳定分泌抗VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株3A2、5D12和6G10，经Western-blot及间接ELISA鉴定，3株单克隆抗体具有良好的特异性，其腹水效价分别为1∶51 200、1∶25 600、1∶12 800。应用效价最高的3A2抗体初步建立了检测猪血清中抗SVA抗体的竞争ELISA。临床样品检测结果表明，建立的竞争ELISA具有高敏感性，高特异性和高准确性。VP1蛋白单克隆抗体的制备为SVA致病机制的研究提供了材料支撑；竞争ELISA的建立对于SVA感染的防控具有重要意义。

• 单位
  中国兽医药品监察所; 中国药科大学; 中国动物卫生与流行病学中心