CD19嵌合抗原受体T细胞制备条件优化及其体内外杀伤作用研究

作者：任春晓; 陈娴娴; 赵莉; 田宇; 徐开林; 赵恺^*

来源：中华血液学杂志, 2022, 43(06): 506-512.

• CD19
• 嵌合抗原受体T细胞
• B细胞淋巴瘤

目的优化小鼠CD3+T细胞体外刺激活化体系及最佳感染时间, 构建小鼠CD19嵌合抗原受体T细胞(mCD19 CAR-T), 并验证其在体内外的杀伤效果。方法磁珠分选纯化小鼠的脾脏CD3+T细胞, 在可溶性抗CD3/CD28抗体、佛波酯+离子霉素、包被抗CD3/CD28抗体3种不同条件下刺激培养, 分别于8、24、48和72 h流式细胞术检测细胞活性情况;用包含小鼠CD19抗体的scFv质粒转染Plat-E细胞, 包装逆转录病毒后感染活化的CD3+T细胞, 制备鼠特异性的CD19嵌合抗原受体T细胞(mCD19 CAR-T)。mCD19 CAR-T细胞在体外与B淋巴瘤细胞株A20细胞共培养, 利用流式细胞术检测其对A20细胞的靶向杀伤效果;建立淋巴瘤小鼠模型, 体内输注mCD19 CAR-T细胞, 检测CAR-T细胞的体内杀伤和分布情况。结果包被抗CD3/CD28抗体的刺激活化效果最佳, 且在刺激后24～48 h具有较好的细胞活性;抗mCD19的逆转录病毒感染CD3+ T细胞效率[(32.27±7.56)%]稳定, 制备的mCD19 CAR-T细胞可特异性杀伤A20肿瘤细胞, 48 h时A20细胞凋亡率为24.3%;体内检测发现输注mCD19 CAR-T细胞第6天即可检测到脾脏中CD19+细胞比例[(1.83±0.58)%]显著降低, 到建模后第12天骨髓和脾脏中CD19+细胞清除更为显著, 与A20细胞组相比差异具有统计学意义[脾脏:(0.36±0.04)%对(47.00±13.46)%, P<0.001;骨髓:(1.82±0.29)%对(37.30±1.44)%, P<0.0001]。且mCD19 CAR-T细胞在外周血、脾脏和骨髓中均有分布, GFP+CD3+ CAR-T细胞比例分别为(2.90±1.12)%、(4.96±0.80)%、(13.55±1.56)%, 以骨髓中占比最高。结论获得优化的CD3+ T细胞活化刺激体系和最佳感染时间, 稳定构建了抗mCD19 CAR-T细胞, 并在体内外验证其具备良好的杀伤能力。

• 单位
  徐州医科大学