高尔基体蛋白的基因克隆及原核表达

作者：庞丽君; 乔录新; 王珊珊; 马杰

来源：医药论坛杂志, 2015, 36(09): 1-5.

• GP73
• 克隆
• 原核表达
• 肝癌

目的构建重组高尔基体蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达,为进一步研发肝癌诊断试剂奠定基础。方法通过RT-PCR获得GP73目的片段,将其克隆入表达载体p ET-28a,经酶切及测序鉴定后,在BL21菌株中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Western Blot鉴定。结果扩增的片段大小与预期一致;p ET-28a-GP73重组质粒通过酶切鉴定与DNA测序证实序列正确;诱导的蛋白用SDS-PAGE电泳和Western Blot检测,与预期相符可见一特异性条带。结论成功获得GP73目的基因并构建了p ET-28aGP73原核表达载体,实现了该融合蛋白的可溶性表达。

• 单位
  北京市肝病研究所; 首都医科大学附属北京佑安医院