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摘要
目的:观察雌激素对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的改变,并检测趋化因子受体CXCR4的表达。方法:实验于2005-02/09在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成。选取武汉市中心医院收治的20例2型糖尿病患者,均根据1999年中国糖尿病学会新的诊断标准确诊。①抽取2型糖尿病患者外周静脉血,常规密度梯度离心法获取单个核细胞,进行内皮祖细胞的分离培养。加入雌二醇培养3d,按其浓度分为雌激素0nmol/L组、雌激素50nmol/L组、雌激素100nmol/L组。②检测内皮祖细胞的生长增殖和凋亡情况,测定其黏附能力。分别以反转录-聚合酶链法及流式细胞术对内皮祖细胞表达CXCR4的水平进行检测。结果:按意向处理分析,实验选取20例2型糖尿病患者血样全部进入结果分析。①内皮祖细胞的培养、鉴定及计数情况:培养4d后可见贴壁的单个核细胞,7d后细胞变为梭形,并慢慢变长。流式细胞仪鉴定细胞表型,可见内皮祖细胞大多表达CD34,且60%～80%表达CD133。对贴壁细胞行荧光染色后,>80%的细胞双染色阳性,可认为是正在分化的内皮祖细胞。计数结果显示,随着加入雌激素浓度的增加,各组内皮祖细胞数量差异具有显著性意义(P<0.05)。②内皮祖细胞增殖及凋亡的检测结果:各组内皮祖细胞增殖率基本相似(P>0.05)。随着雌激素浓度的增加,雌激素0nmol/L组、雌激素50nmol/L组、雌激素100nmol/L组的凋亡率呈下降趋势,差异有显著性意义(P<0.05)。③内皮祖细胞黏附能力检测结果:各组内皮祖细胞黏附能力基本相似(P>0.05)。④CXCR4在内皮祖细胞上的表达情况:流式细胞术检测各组内皮祖细胞上CXCR4的表达阳性率,可见随着雌激素浓度增加,各组CXCR4表达率也随之增加,差异具有显著性意义(P<0.05)。反转录-聚合酶链反应法检测CXCR4的表达,亦得到相似结果。结论:雌激素对2型糖尿病患者内皮祖细胞的数量及功能均产生影响,可明显抑制内皮祖细胞凋亡及上调CXCR4的表达。提示雌激素可能在防止糖尿病周围血管病变上发挥一定作用。
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单位华中科技大学同济医学院; 协和医院; 武汉市中心医院
