干扰miR-21调控人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的实验研究

作者：廖高源; 骆华; 刘琛; 王小波

来源：临床和实验医学杂志, 2019, 18(13): 1379-1383.

• 前列腺癌
• 微小RNA-21
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

目的观察干扰微小RNA-21(miR-21)对人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭的影响,并初步探讨其调控机制。方法收集对数期生长PC-3细胞株及人前列腺正常上皮细胞株RWPE-1,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并对比其miR-21基因表达情况。取对数期生长PC-3细胞株,采用脂质体转染法将miR-21抑制剂(inhibitor)及NC inhibitor质粒转染至PC-3细胞,分别设为干扰组和空载组,另取不做处理PC-3细胞为空白组。采用倒置荧光显微镜检测转染效率;采用MTT法检测并对比各组不同时刻吸光度(OD值);采用划痕试验及Transwell试验检测并对比三组穿膜细胞数及迁移率;采用RT-PCR法检测并对比三组miR-21、基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法检测并对比三组TIMP3、MMP-9蛋白表达水平。结果 PC-3细胞miR-21相对表达量显著低于RWPE-1细胞(P <0. 05);倒置显微镜下检测转染24 h后干扰组和空载组转染效率分别为(82. 16±8. 20)%、(80. 23±8. 69)%;干扰组MTT实验不同时刻OD值均显著低于空白组和空载组(P <0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05),三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势(P <0. 05);干扰组12 h、24 h迁移率均显著低于空白组和空载组(P <0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05),三组24 h迁移率显著高于12 h(P <0. 05);干扰组穿膜细胞数显著少于空白组和空载组(P <0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05);干扰组miR-21相对表达量、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量显著低于空白组和空载组(P <0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05);干扰组TIMP3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白组和空载组(P <0. 05),空白组与空载组比较,差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论前列腺癌细胞miR-21异常高表达,干扰miR-21可抑制人前列腺癌细胞株PC-3增殖、迁移及侵袭能力,可能与上调TIMP3 mRNA和蛋白、下调MMP-9 mRNA和蛋白有关。