特异沉默精子相关抗原9基因对前列腺癌PC-3细胞的影响

作者：毛立军; 丁猛; 徐凯; 曹航; 刘宁; 陈家存

来源：中华实验外科杂志, 2017, 34(04): 638-641.

• 前列腺癌
• 精子相关抗原9基因
• RNA干扰

目的通过RNA干扰技术,特异沉默精子相关抗原9(SPAG9)基因的表达,观察其对前列腺癌PC-3细胞的影响,并探讨其机制。方法构建SPAG9基因特异性短发卡RNA(shRNA)表达载体pGPU6-绿色荧光蛋白(GFP)-SPAG9,用Lipofectamine 2000将pGPU6-GFP-SPAG9转染人前列腺癌PC-3细胞,以空质粒pGPU6-GFP及未转染的细胞作对照。转染后48 h,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SPAG9 mRNA表达,Western blot检测SPAG9蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测特异沉默SPAG9后PC-3细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、血管内皮生长因子(VEGF)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,进一步分析特异沉默SPAG9基因对前列腺癌PC-3影响的可能机制。结果酶切及测序结果表明质粒pGPU6-GFP-SPAG9构建成功。转染pGPU6-GFPSPAG9 48 h后,PC-3细胞SPAG9 mRNA、蛋白表达水平分别为1.96±0.16和0.39±0.05,显著低于空载体组(3.23±0.18和1.13±0.04)及空白对照组(3.08±0.12和1.25±0.05),与空白对照组、空载体转染组比较,差异有统计学意义(P=0.000);CCK-8结果表明:转染48 h后,pGPU6-GFPSPAG9组细胞吸光度(A)值为31.9±2.6,与空白对照组(48.1±2.8,P=0.016)、空质粒组(47.8±2.8,P=0.023)比较,差异有统计学意义;凋亡结果示:pGPU6-GFP-SPAG9组PC-3细胞凋亡率为(12.12±0.69)%,而空质粒组、空白对照组凋亡率分别为(6.43±0.31)%(P=0.020)、(5.19±0.33)%(P=0.014),与对照组比较,差异有统计学意义;Transwell侵袭实验结果显示,pGPU6-GFPSPAG组侵袭细胞数为(91.01±5.5)个,而空白对照组与空质粒组侵袭细胞数分别为(165.3±6.6)个(P=0.007)、(161.3±6.1)个(P=0.009),与对照组比较,差异均有统计学意义。Western blot结果显示,与两对照组比较,pGPU6-GFP-SPAG9组PC-3细胞MMP-2、VEGF、Vimentin的表达下降,而E-cadherin表达上调,差异有统计学意义(P=0.000)。结论通过RNA干扰技术,特异沉默SPAG9基因可抑制前列腺癌PC-3细胞增殖和侵袭并促进凋亡,其机制可能是通过下调MMP-2、VEGF、Vimentin的表达,上调E-cadherin表达。

• 单位
  徐州医学院附属医院