组织蛋白酶D沉默调节颗粒细胞的生物学行为并影响山羊的产仔性状（英文）

作者：Zhinan ZHOU; Xiang CHEN^*; Min ZHU; Weiwei WANG; Zheng AO; Jiafu ZHAO; Wen TANG; Lei HONG

来源：Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology), 2021, 22(11): 893-906.

• 组织蛋白酶D(CTSD)
• 产羔性状
• 颗粒细胞
• 细胞凋亡
• 细胞周期
• 细胞增殖

目的:探究组织蛋白酶D(Cathepsin D,CTSD)对颗粒细胞生物学行为及山羊产羔性状的调控机制。创新点:以中国贵州省优良地方品种黔北麻羊为对象,以CTSD为候选基因,以卵泡颗粒细胞为模型,首次探明了CTSD沉默对山羊颗粒细胞生物学行为的影响及其对山羊产羔性状的调控机理,对进一步挖掘、创新和利用中国山羊品种资源等方面具有重要意义。方法:使用免疫组化法对CTSD在卵巢中进行定位分析;应用蛋白质印迹法(western blotting)技术探究CTSD在单、多羔山羊卵巢中的表达差异;使用细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)技术检测CTSD沉默对细胞增殖的影响;使用流氏细胞仪检测CTSD沉默对颗粒细胞凋亡及周期的影响;使用定量逆转录聚合酶链式反应(q RT-PCR)技术探究CTSD沉默对细胞增殖因子(增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA))、细胞凋亡标志基因(B细胞白血病/淋巴瘤2(B cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bcl-2-associated X,Bax)、半胱天冬酶3(caspase-3))、细胞周期蛋白(细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、细胞周期蛋白D2(cyclin D2)、细胞周期蛋白E(cyclin E))及多胎性状候选基因(骨形态发生蛋白受体IB(bone morphogenetic protein receptor, type 1B,BMPR-IB)、促卵泡素受体(follicle stimulatinghormonereceptor,FSHR)、抑制素α(inhibinsubunitα,INHA))表达的影响;使用westernblotting检测CTSD敲低对多胎性状候选基因BMPR-IB、FSHR、INHA在翻译水平表达的影响。结论:CTSD沉默可能通过一系列因素的表达水平(包括PCNA、Bcl-2、Bax、caspase-3、cyclin A1、cyclin D2和cyclin E)来调控颗粒细胞的增殖、凋亡和细胞周期进展,进而影响颗粒细胞的生物学功能。此外,CTSD可能通过调控多产性状的候选基因,包括BMPR-IB、FSHR和INHA来影响卵泡发育和排卵,从而间接影响山羊的产仔数。