番茄斑萎病毒2个非结构蛋白VIGS体系的初步构建

作者：杨婷婷; 赵立华; 邱润霜; 陈思; 张洁; 李博文; 张仲凯; 马长乐^*

来源：西南林业大学学报, 2022, 42(02): 151-156.

• 本氏烟
• 番茄斑萎病毒
• 病毒诱导的基因沉默
• 非结构蛋白
• 实时荧光定量PCR

将番茄斑萎病毒（TSWV）的NSm、NSs基因200 bp左右构建到pTRV-PTV00沉默载体上，通过农杆菌GV3101浸润本氏烟。注射10 d左右，待注射PDS基因的植株发白，将注射pTRV-PTV00-NSm、pTRV-PTV00-NSs以及pTRV-PTV00载体的植株接种TSWV，显症后采集系统叶（接种叶上一叶）应用实时荧光定量PCR检测NSm、NSs基因表达量。通过测定NSm、NSs基因表达量发现NSm基因的沉默效率为86.7%、NSs基因的沉默效率为92.00%。结果表明：通过pTRV-PTV00载体构建NSm、NSs基因沉默载体沉默效率接近90.00%，此载体适用于病毒基因沉默载体的构建，且NSm、NSs基因沉默载体能应用后续基因功能研究。

• 单位
  云南省农业生物技术重点实验室; 西南林业大学; 生命科学学院; 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所; 农业部