肺腺癌细胞S100A6基因siRNA慢病毒载体构建及鉴定

作者：李小龙; 姜华; 金发光; 南岩东

来源：现代肿瘤医学, 2015, 23(20): 2907-2912.

• S100A6基因
• siRNA慢病毒载体
• RNA干扰
• A549细胞

目的:构建肺腺癌细胞S100A6基因siRNA慢病毒载体并鉴定。方法:慢病毒载体(pL enR-GPH)构建靶向S100A6基因的RNA干扰重组体,用以建立S100A6基因稳定沉默的肺腺癌A549细胞株。结果:PCR鉴定结果显示3个扩增的阳性片段均已插入pL enR-GPH载体,测序结果证实三个重组慢病毒载体SH1、SH2、SH3的插入序列完全正确,重组慢病毒载体转染到293T细胞中包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549细胞后,RT-PCR和Western blot检测结果均证实三组重组体感染的细胞内S100A6 mRNA和蛋白的表达受到不同程度的抑制,沉默效率分别为98.29%、84.05%及78.24%。结论:成功构建了S100A6基因RNAi慢病毒重组载体,并建立了其稳定表达的肺腺癌A549细胞株,为探讨S100A6基因对肺腺癌生物学行为的影响提供了可靠的细胞模型。

• 单位
  第四军医大学; 唐都医院; 陕西省肿瘤医院