Streptomyces septatus磷脂酶D在毕赤酵母中的重组表达及酶学性质分析

作者：黄琳; 马杰莹; 王爽; 王楠; MORADANA GAMAGE Rasadi Sajeewa Rajakaruna; 路福平; 刘逸寒^*

来源：食品科学, 2020, 41(08): 100-107.

• 链霉菌
• 磷脂酶D
• 毕赤酵母
• 表达
• 酶学性质
• 磷脂酰丝氨酸

以Streptomyces septatus TCCC 21057基因组为模板,扩增得到磷脂酶D(phospholipase D,PLD)基因(pld),经合成获得pld密码子优化基因(pldm),以pPIC9K为表达载体,毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为宿主菌株,构建获得毕赤酵母重组菌株GS115/pPIC9K-pldm,摇瓶发酵后获得的重组PLD(rPLDM)转酯活力达2.37 U/mL;rPLDM经纯化后进行转酯酶学性质分析,其最适作用温度为60℃,最适作用pH值为6.5;在单水相反应体系中,40℃、pH 6.5、Ca2+浓度10 mmol/L、大豆磷脂酰胆碱和L-丝氨酸物质的量比1∶10、rPLDM添加4.0 U/mL,反应6 h后,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)的产率可达到33%。本研究通过对rPLDM的重组表达、转酯酶学性质及催化合成PS的研究,为进一步实现酶法合成新资源食品PS奠定了基础。

• 单位
  天津科技大学; 生物工程学院; 工业发酵微生物教育部重点实验室