恶性胸/腹水肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外选择性CD8+T细胞扩增的培养体系建立及功能表型分析

作者：刘佳梦; 毛朝明^*; 叶飞; 袁啸

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(04): 311-317.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009537

• 肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)
• 肺癌
• 恶性胸/腹水

目的 探讨体外恶性胸/腹水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)大量培养扩增方法并初步研究其分子表型及功能特征。方法 无菌操作条件下抽取恶性肿瘤患者胸/腹水，密度梯度离心法分离淋巴细胞，采用γ干扰素(IFN-γ)、抗CD3多克隆抗体OKT3和白细胞介素2(IL-2)为基础的联合方案扩增TIL,并记录其细胞形态及扩增速度。采用流式细胞术动态检测扩增淋巴细胞的分子表型T淋巴细胞亚群中淋巴细胞激活信号分子F7(SLAMF7)、CD45RO、颗粒酶B(GZMB)、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD57阳性细胞比例，CCK-8法检测其对肿瘤的杀伤能力。结果 在本培养方案中，TIL细胞培养至第26天状态良好，第30天开始增殖速率下降。CD4- CD8+ T细胞及CD8+ CD56+ T细胞比例随培养时间的延长逐渐提高，CD4+ CD8- T细胞的比例逐渐下降，CD4+ CD25+ T细胞始终保持低水平状态。与扩增前相比，SLAMF7、CD45RO、GZMB、PD-1阳性细胞比例均有显著提高，耗竭性T细胞标志CD57表达比例也逐渐升高。TIL源性扩增性T细胞杀伤肿瘤细胞能力明显强于外周血单个核细胞(PBMC)源性，当效靶比为10∶1时杀伤能力最强，且杀伤能力在肿瘤细胞类型间存在明显差异。结论 建立了从癌性胸/腹水中大量扩增TIL的培养方案，方法简便易行、效率高、杀伤肿瘤能力强，其效应细胞主要为CD8+ T细胞，表型处于活化状态。

• 单位
  江苏大学附属医院