一种新型双荧光素酶报告基因表达载体的构建

作者：冯龙; 马云云; 曹珊; 李晓娟; 王媛媛; 陈肖楠; 孙倩倩; 吴建博; 赵国强

来源：郑州大学学报(医学版), 2018, 53(01): 38-41.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2017.50.012

• 荧光素酶报告基因
• 表达载体
• hRLUC

目的:构建一种新型的双荧光素酶报告基因表达载体。方法:设计并扩增海肾荧光素酶基因hRLUC,将其插入到双酶切的含有萤火虫荧光素酶报告基因(Firefly)的载体pGL4.10中,得到pGL4.10-hRLUC;使用lipofectamine3000将pGL4.10和pGL4.10-hRLUC分别转染入HEK293细胞,检测细胞中荧光素酶活性,以未转染细胞作对照。结果:使用PCR方法获得hRLUC表达单元(2 350 bp);双荧光素酶报告基因表达载体pGL4.10-hRLUC经酶切和测序鉴定,插入正确。转染pGL4.10组荧光素酶活性相对值为(220.311±2.082);转染pGL4.10-hRLUC的细胞中荧光素酶活性低于pGL4.10转染细胞,高于未转染细胞(P<0.05)。结论:成功构建了双荧光素酶报告基因(hRLUC和Firefly)表达载体。

• 单位
  基础医学院; 河南中医药大学; 郑州大学; 河南医学高等专科学校