位点特异性PCR鉴别桃仁中掺入苦杏仁的方法分析

作者：卢雪蕊; 史中飞; 滕宝霞; 倪琳; 杨平荣; ***^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2021, 27(11): 155-161.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210448

• 桃仁
• 苦杏仁
• 核糖体DNA内转录间隔区(ITS)
• 基因序列
• 聚合酶链式反应(PCR)
• 单核苷酸多态性(SNP)位点
• 特异性引物

目的:由于中药材传统真伪鉴别方法的局限性,本研究拟通过位点特异性聚合酶链式反应(PCR)建立一种能够快速鉴别桃仁中掺有苦杏仁的方法。方法:通过比对苦杏仁与桃仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)基因序列,寻找单核苷酸多态性(SNP)位点并设计特异性鉴别引物。利用不同的苦杏仁和桃仁样品进行PCR扩增,对影响PCR反应体系的退火温度、引物浓度、循环数等条件进行优化,并对该方法的专属性和检出限进行了考察。另外,利用建立的PCR鉴别方法对不同来源和不同产地桃仁中掺有不同比例苦杏仁的样品进行检测,以验证该方法的稳定性和准确性。结果:建立了桃仁中掺混苦杏仁的特异性PCR鉴别方法,在退火温度63℃和引物循环数30个时仅有苦杏仁能扩增得到432 bp的特异性条带,桃仁样品则无此条带。该方法对苦杏仁的最低检出限为0.2 ng,其对桃仁中掺入苦杏仁的检出限为1%,可用于日常桃仁中掺混苦杏仁的检测。结论:建立的位点特异性PCR方法能够准确地检测桃仁中是否掺有苦杏仁,可为桃仁的质量控制提供实验依据,以保障其临床用药安全。

• 单位
  甘肃省药品检验研究院; 兰州大学