PITC柱前衍生-高效液相色谱法测大米肽中的16种氨基酸含量

作者：黄莹; 黄晶; 杨晓^*; 陈曦; 胡武瑶

来源：食品工业科技, 2023, 44(24): 279-285.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2023020133

• 大米肽
• 氨基酸
• 异硫氰酸苯酯
• 柱前衍生
• 高效液相色谱

为了建立一种以高效液相色谱检测大米肽中氨基酸含量的方法，以异硫氰酸苯酯（Phenyl isothiocyanate,PITC）为柱前衍生剂，实现大米肽中16种氨基酸（天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（Tyr）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、赖氨酸（Lys））能同时、快速、有效地分析检测。采用Athena AAA色谱柱为分析柱，以甲醇:乙腈:水=20:60:20和50 mmol/L乙酸钠（p H6.5）为流动相，进行梯度洗脱，流速为1.0 m L/min，柱温35℃，紫外检测器波长为254 nm。结果表明，16种氨基酸在0.125～2.5μmol/m L范围内具有良好的线性关系，14种氨基酸线性关系的决定系数R2≥0.9999，另外2种氨基酸的决定系数R2分别为0.9998和0.9994，检出限为0.003%～0.018%，定量限为0.010%～0.059%，加标回收率在82.21%～103.59%,RSD均小于5%。该方法使得大米肽中16种氨基酸很好地分离，其中含量最高的氨基酸是谷氨酸（Glu），含量范围为13.11%±0.39%～21.38%±0.48%，含量最低的氨基酸是组氨酸（His）或蛋氨酸（Met），含量范围为1.59%±0.05%～2.27%±0.03%或1.26%±0.05%～2.32%±0.06%，其准确度和精密度佳，灵敏度和回收率高，适用于大米肽的氨基酸含量分析。