猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作者：郭慧娟; 李秀丽; 张国伟; 鄢明华; 李海花; 李富强

来源：中国畜牧兽医, 2014, 41(05): 39-45.

• 猪圆环病毒2型
• 荧光定量PCR
• TaqMan探针

采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)衣壳蛋白(capsid protein,CAP)基因,构建了重组质粒p-18T-CAP,并将其作为标准阳性模板。参照GenBank收录的PCV2 ORF2基因设计合成1对特异性的引物和与该引物相匹配的特异探针,通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒p-18T-CAP为标准品进行TaqMan荧光定量PCR扩增,建立了一种检测PCV2的TaqMan荧光定量PCR方法。试验结果显示,该方法与猪圆环病毒1型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒等均无交叉反应;该方法最低可检测到4.53×102拷贝/μL,比PCR检测方法高100倍;其标准曲线线性范围是102109拷贝/μL,且具有良好的重复性。

• 单位
  天津市畜牧兽医研究所; 天津农学院