杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定

作者：李慎柯; 贾岩龙; 刘红涛; 李杰; 鲁照明; 王建民; 薛乐勋

来源：郑州大学学报(医学版), 2006, (03): 429-432.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2006.03.014

• 杜氏盐藻
• 硝酸盐还原酶
• 突变株

目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NR cDNA全长序列,分析其突变位点。方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库。然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库。再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群。用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株。然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性。②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NRcDNA的全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NRcDNA序列比较,分析其突变位点。结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变。它们均在近3′端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变。此外,2株还分别由于在1235和1639的位点突变而产生了一个终止密码子。结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 郑州大学