普萘洛尔对人食管鳞癌细胞生物学功能的影响

作者：卓庆娅; 钱河; 赵宝生^*; 齐博; 刘玉珍

来源：中国应用生理学杂志, 2022, 38(06): 754-765.

• 普萘洛尔
• 食管鳞癌
• 细胞培养
• 增殖
• 迁移
• 周期
• 凋亡
• 自噬
• 裸鼠

目的:探索普萘洛尔对食管鳞癌细胞皮下成瘤和食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、迁移、周期、凋亡、自噬的影响及其可能的分子机制。方法:MTT(噻唑蓝)检测细胞增殖：常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450、TE-1细胞，设置PBS组(不加Propranolol),加药组(40、60、80、100μmol/L),每组5个复孔，分别处理0、24、48、72 h后，每孔加入MTT 10μl(5 mg/ml),490 nm处测定吸光度值。Transwell检测迁移：常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450、TE-1细胞，设置PBS组(不加Propranolol),加药组(40、60μmol/L),每组2个复孔，40 h后拍照，实验重复三次后统计学分析。流式细胞术检测细胞周期及凋亡：常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450、TE-1细胞，设置PBS组(不加Propranolol),加药组(80μmol/L),固定、染色，检测488 nm处荧光。Western blot检测蛋白表达:常规培养食管鳞癌Eca109、KYSE-450细胞，设置PBS组(不加Propranolol),加药组(60、80μmol/L),凝胶电泳，湿法转膜，ECL显影，实验重复三次后统计学分析。裸鼠皮下成瘤实验：10只裸鼠，设置PBS组(不加Propranolol)和Propranolol组(加药组),每组5只，均接种Eca109细胞5×106 cells/100μl于右侧腋下，加药组隔日灌胃，每次0.4 ml(6 mg/kg),期间隔日测量肿瘤大小，持续3周。20 d后处死裸鼠取瘤体组织。结果:结果显示Propranolol可抑制Eca109、KYSE-450、TE-1细胞增殖，48h IC50均为70μmol/L;抑制Eca109、KYSE-450、TE-1细胞迁移，且具浓度依赖性(P<0.05);阻滞Eca109细胞周期于G2/M期，阻滞KYSE-450细胞和TE-1细胞周期于G0/G1期，并促进三种细胞凋亡(P均<0.05);细胞免疫荧光结果显示Propranolol处理TE-1细胞12 h、24 h、36 h后LC3荧光强度增加(P均<0.05);Western blot结果显示与PBS组比较，加药组p-mTOR、p-Akt、cyclin D1蛋白表达量下调、cleaved caspase 9蛋白水平上调(均P<0.05);裸鼠皮下成瘤结果显示对照组瘤重(0.91±0.05)g,实验组瘤重(0.65±0.12)g,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:普萘洛尔抑制ESCC细胞增殖、迁移、周期，促进其凋亡和自噬，并抑制裸鼠皮下肿瘤生长，其机制可能与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

• 单位
  新乡医学院; 新乡医学院第一附属医院