敲低细丝蛋白B对小鼠颅顶成骨前体细胞增殖、迁移及凋亡的影响

作者：王茜; 俞丽; 贾麒钰; 黄金勇; 刘泽彪; 张俊; 加依达尔·地力木拉提; 谢增如^*; 马海蓉^*

来源：中国组织工程研究, 2023, 1-5.

• 细丝蛋白B
• MC3T3-E1细胞
• 增殖
• 迁移
• 凋亡

背景：细丝蛋白B(FLNB)能将肌动蛋白细胞骨架交联成动态结构，对细胞的定向移动至关重要，可调控软骨细胞的增殖、分化及凋亡的发生。然而，细丝蛋白B对成骨细胞增殖、迁移及凋亡的影响尚未报道。目的：探究细丝蛋白B对MC3T3-E1细胞的增殖、迁移及凋亡的影响。方法：构建敲低细丝蛋白B表达的腺病毒载体(sh-FLNB1、sh-FLNB2、sh-FLNB3)，感染小鼠颅顶成骨前体细胞(MC3T3-E1)，嘌呤霉素药筛，通过Western Blot以及RT-PCR技术检测敲低效率，选取敲低细丝蛋白B效率最佳的MC3T3-E1细胞株作为稳转细胞株。将细胞分为Blank组、mc3t3组、sh-NC组(空载体)、sh-FLNB组(sh-FLNB慢病毒)，Blank组为α-MEM完全培养基无细胞；mc3t3组为单纯α-MEM完全培养基培养；sh-NC组、sh-FLNB组为含有嘌呤霉素2.5μg/mL的α-MEM完全培养基培养。培养3 d采用CCK-8法和划痕实验检测MC3T3-E1细胞增殖和迁移能力；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；RT-PCR进一步验证细胞凋亡相关基因的表达。结果与结论：(1)Western Blot及RT-PCR结果显示，sh-FLNB3组细丝蛋白B敲低效率最佳，差异有显著性意义(P <0.000 1)，以此作为后续实验稳转细胞株；(2)CCK-8数据显示，敲低细丝蛋白B后MC3T3增殖能力显著减弱(P <0.05);(3)划痕实验显示，敲低细丝蛋白B后MC3T3的迁移能力明显下降；(4)流式细胞仪及RT-PCR显示，敲低细丝蛋白B后，MC3T3-E1细胞凋亡率增加，促凋亡因子Bax表达显著上升，抑凋亡因子Bcl-2表达下降(P <0.05);(5)结果说明，细丝蛋白B敲低可降低MC3T3-E1细胞的增殖能力，细胞迁移能力下降，并增加细胞凋亡的发生。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 华北理工大学