结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的表达与纯化

作者：温见翔; 吴少庭; 陈群; 秦莉; 袁仕善; 黄达娜; 张仁利; 高世同

来源：中国人兽共患病学报, 2006, 22(01): 39-42.

DOI：10.3969/j.issn.1002-2694.2006.01.010

• 结核分枝杆菌
• ESAT-6
• 表达
• 纯化 Mycobacterium tuberculosis
• ESAT-6
• expression
• purification

目的构建结核分枝杆菌esat-6基因原核表达载体,使其在大肠杆菌中表达融合重组蛋白,并纯化。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出esat-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建pGEX-esat-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌JM109;PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用谷胱甘肽-琼脂糖亲合层析法纯化融合蛋白。结果PCR扩增出esat-6 288bp的基因,克隆到pMD18-T载体中,经测序与GenBank中序列一致...

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 深圳市疾病预防控制中心; 广东医科大学