基于电融合方法的牛妊娠相关糖蛋白单克隆抗体制备及其应用

作者：尹茉莉; 聂元旺; 周婉婷; 张爽; 刘磊; 冀慧敏; 刘方圆; 王会岩^*

来源：中国兽医杂志, 2022, 58(12): 25-30.

• 牛妊娠相关糖蛋白
• 电融合
• 单克隆抗体
• 双抗夹心ELISA

为了制备抗牛妊娠相关糖蛋白(bPAG)单克隆抗体，本试验提纯妊娠母牛子叶bPAG,免疫小鼠后进行细胞电融合，通过ELISA、Western blot方法对抗bPAG单克隆抗体进行筛选。结果显示：获得5株bPAG特异性强、灵敏度高的单克隆抗体，抗体最高效价为1∶256 000,亲和力最高可达到3.75×107 L/mol, 5株单克隆抗体均能识别天然bPAG蛋白。采用高碘酸钠法对单抗标记辣根过氧化物酶(HRP),将最佳配对抗体用于建立双抗夹心ELISA方法，对64个血清样本进行检测。结果显示：以10H2作为捕获抗体与HRP-5G1配对建立的双抗夹心ELISA方法检测bPAG阳性和阴性血清样本，与爱德士牛早孕检测试剂盒比较符合率达95.2%。结果表明，本试验运用细胞电融合法制备的抗bPAG单克隆抗体可应用于建立双抗夹心ELISA体系，为下一步bPAG检测试剂盒的研制提供技术支持。

• 单位
  吉林医药学院