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摘要
目的：研究LAG1长寿保障同系物2(LASS2)对甲状腺未分化癌细胞株8505c凋亡及自噬的影响及可能的分子机制。方法：用Adv-GFP或Adv-LASS2-GFP重组腺病毒感染8505c细胞，细胞分为阴性对照（NC）组、空载体组（Adv-GFP组）和实验组（Adv-LASS2-GFP组）。感染48 h后提取各组细胞总RNA和蛋白，采用RT-qPCR和Western blot分别检测LASS2 mRNA和蛋白表达水平的变化；CCK-8和集落形成实验评价各组细胞增殖能力的差异；TUNEL染色评估各组细胞凋亡水平；透射电子显微镜观察细胞超微结构及自噬状态；Western blot检测各组细胞凋亡及自噬相关蛋白[细胞色素C(Cyto-C)、Bcl-2、Bax、p62、LC3-I、LC3-II和beclin-1]的表达水平；免疫共沉淀（CoIP）联合液相色谱-质谱（LC-MS）鉴定与LASS2相互作用的蛋白，结合基因本体论（GO）数据库等分析并经Co-IP进一步验证互作关系。结果：与NC组和Adv-GFP组相比，Adv-LASS2-GFP组LASS2 mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P<0.01），且随时间延长Adv-LASS2-GFP组细胞增殖能力显著被抑制，集落形成能力降低，细胞凋亡增加（P<0.01）；透射电镜结果显示，与NC组和Adv-GFP组相比，Adv-LASS2-GFP组细胞可见双层膜结构的自噬小体及大量自噬溶酶体；Western blot结果显示，Adv-LASS2-GFP组Bcl-2和p62蛋白表达水平较NC组和Adv-GFP组均显著下调（P<0.01）,Bax、Cyto-C和beclin-1表达及LC3-II/LC3-I比值均显著上调（P<0.01）;Co-IP/LC-MS鉴定及GO等富集分析筛选出参与调控自噬信号通路且与LASS2相互作用的4个蛋白，分别为p62、HSC70、HSP90和CSNK2A1。Co-IP结果显示LASS2与p62不存在直接相互作用。结论：LASS2能促进8505c细胞凋亡并激活自噬，其作用机制可能是通过与p62/HSC70/HSP90/CSNK2A1相互作用而影响自噬和凋亡级联信号通路。
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