普通肝素对高迁移率族B1介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5下调的保护作用

作者：吴蕾; 栾正刚^*

来源：中华急诊医学杂志, 2018, 27(11): 1237-1241.

• 普通肝素
• HMGB1
• 紧密连接
• Claudin-5
• 内皮细胞通透性

目的研究高迁移率族蛋白B1 (high mobility group box-1 protein, HMGB1)对人脐静脉内皮细胞屏障通透性的影响,以及普通肝素对HMGB1介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5下调的保护作用。方法将经胰酶消化后的人脐静脉内皮细胞于培养瓶中传代培养,并分成4组:空白对照组(加入等量PBS)、rhHMGB1处理组(100 ng/mL)、普通肝素对照组(UFH10 U/mL)、rhHMGB1+普通肝素处理组(100 ng/mL rhHMGB1+UFH 10 U/mL)。传代培养后的人脐静脉内皮细胞,通过MTT法测定内皮细胞的存活率。Transwell法测定内皮细胞通透性;免疫荧光法对Claudin-5表达及分布进行测定;通过蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Claudin-5蛋白表达。结果用rhHMGB1 (100 ng/mL)处理内皮细胞后,与空白对照组比较细胞活力无明显变化(P>0.05);用rhHMGB1 (100 ng/mL)分别处理内皮细胞3 h、6 h后,内皮细胞屏障通透性较空白对照组无明显变化(P>0.05);而经rhHMGB1处理12 h、24 h后,与空白对照组相比,内皮细胞屏障通透性显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而普通肝素和rhHMGB1共同孵育内皮细胞12 h、24 h后,其内皮细胞屏障通透性均低于rhHMGB1处理组(P<0.05)。免疫荧光和Westernblot研究表明, rhHMGB1处理内皮细胞24 h后,细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5分布和表达降低;而经普通肝素和rhHMGB1共同孵育后,细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达提高,Claudin-5的荧光强度增强。结论HMGB1可介导内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的分布异常和表达下降,以及增加内皮细胞屏障的通透性;普通肝素可改善HMGB 1介导的内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达和分布及内皮细胞屏障通透性。

• 单位
  中国医科大学附属第一医院