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摘要
目的制备叶酸靶向共载组织因子途径抑制物2(TFPI-2)及顺铂磁性纳米复合物,探讨其对鼻咽癌HNE—1细胞的靶向性和体外抑制效应。方法通过酰胺化反应合成叶酸靶向高聚物叶酸-聚乙二醇—聚乙烯亚胺(FA-PEG—PEI),采用静电吸附技术,将其与本课题组前期制备的载顺铂磁纳米粒(MNP—CDDP)及TFPI-2质粒混合,得到终产物FA—PEG-PEI/MNP—CDDP/TFPI-2。核磁氢谱验证高分子聚合物的合成。动态光散射(DLS)及透射电镜(TEM)观测其粒径、电荷及形态。邻二氮菲法及邻苯二胺法测定纳米复合物中铁及顺铂(CDDP)的含量。琼脂糖凝胶电泳分析载体FA-PEGPEI/MNP-CDDP与TFPI-2质粒的结合情况。普鲁士蓝铁染色法及荧光显微镜观察磁性纳米复合物对鼻咽癌(NPC)细胞的分子靶向性。Western印迹检测磁性纳米复合物转染HNE-1细胞后TFPI-2蛋白的表达情况。Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞计数试剂盒、流式细胞技术检测复合物对HNE—1细胞增殖、凋亡的影响。结果核磁氢谱在FA、PEG和PEI相应的频率上可见特征吸收峰。DLS测得产物FA-PEG-PEI/MNP—CDDP/TFPI-2复合物平均粒径为141.1 nm,平均电荷为21.5 mV。透射电镜下可见纳米微粒有良好的分散性,但粒径大小不太均匀。铁含量与顺铂载药量分别为116.2μg/ml及92.88μg/ml。琼脂糖凝胶电泳显示,当载体FA—PEG—PEI/MNP—CDDP与TFPI-2质粒质量比≥1时,载体能完全吸附质粒,并且有效保护质粒免受DNA酶的消化作用。铁染色和荧光显微镜观测可见叶酸受体(FR)阳性HNE-1细胞内蓝染磁颗粒及绿色荧光点比FR阴性CNE-2细胞显著增多(P<0.05)。HNE-1细胞被载TFPI-2质粒的复合物转染后,TFPI-2蛋白的表达量比空白载体组及单纯质粒组明显增高(P<0.05)。复合物对HNE—1细胞有明显的体外抑制效应,抑制率及凋亡率分别为64.00%及49.61%,明显高于载体组(8.19%,9.26%)、单载质粒组(40.35%,19.85%)、单载顺铂组(56.15%,36.46%),均P<0.05。结论采用酰胺化反应和静电吸附技术成功合成了FA-PEG—PEI/MNP—CDDP/TFPI-2磁性纳米复合物,该复合物对鼻咽癌HNE—1细胞具有良好的靶向性及体外抑制效应。
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