人血管内皮抑制素vasostatin_(120-180)在大肠杆菌中的表达纯化及初步的抗血管生成活性研究

作者：徐倩; 孙启明; 华子春

来源：东南大学学报(医学版), 2008, 27(02): 75-80.

DOI：10.3969/j.issn.1671-6264.2008.02.001

• 偏爱密码子
• 血管内皮抑制素120-180
• 包涵体
• 变复性
• 鸡胚尿囊膜试验 codon usage preference
• vasostatin120 180
• inclusion body
• refolding strategy
• chick embryo chorioallantoic membrane assay

目的:在大肠杆菌中克隆和表达人源血管内皮抑制素vasostatin120-180(VAS)基因,并进行分离纯化及抑制新生血管生成活性鉴定。方法:根据大肠杆菌偏爱密码子,应用化学合成和分子克隆方法得到人源血管内皮抑制素120-180片段(即VAS)的编码基因。通过PCR和限制性内切酶消解,将VAS编码基因克隆入大肠杆菌表达载体pET28a中,并在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导、表达带有His融合标签的His-VAS重组蛋白。VAS蛋白的表达水平大约占细菌总蛋白的45%,大多数目的蛋白以包涵体形式存在,经过体外包涵体变性、复性及纯化,采用SDS-PAGE分析鉴定,用鸡胚尿囊膜血管生成抑制试...

• 单位
  南京大学; 医药生物技术国家重点实验室