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摘要
为实现产黄曲霉毒素真菌的快速检测，本研究建立了检测产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因的双重荧光定量PCR方法。分别针对aflR基因和nor-1基因保守序列，各设计两对特异性引物和探针，通过引物对间的有效性实验各筛选出1对最优的aflR引物探针和nor-1引物探针，随后建立并优化双重荧光定量PCR的反应条件，构建标准曲线，测定该方法的重复性、灵敏度和特异性。结果显示，本实验成功筛选出aflR-2和nor1-2两组引物/探针组合，并优化和确定了引物/探针的最佳反应终浓度。特异性实验结果显示，本研究建立的检测方法仅对产黄曲霉毒素真菌的aflR基因和nor-1基因呈现特异性扩增，对黑曲霉、碳黑曲霉、赭曲霉和镰刀菌等常见产毒真菌的核酸样品均无扩增曲线。建立的方法重复性好，批内和批间变异系数均<3%，双重反应体系的检测灵敏度均低至1×102 copies/μL。利用本研究所建立的方法与ELISA试剂盒分别对80份食品样品进行检测，结果显示，双重荧光定量PCR共检测出9份阳性样品，而ELISA试剂盒只检测出了7份阳性，表明本研究建立的方法具有更高的灵敏度和准确性。
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